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                    SZDBZ 132-2015 小反芻獸疫抗體檢測 競爭酶聯免疫吸附法

                    上傳者:佚名(113034675)| 上傳時間:2020-05-17 09:07:20

                    SZDBZ 132-2015 小反芻獸疫抗體檢測 競爭酶聯免疫吸附法
                    SZDBZ 132-2015 小反芻獸疫抗體檢測 競爭酶聯免疫吸附法

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                    1、術文件SZDBZSZDBZ小反芻獸疫抗體檢測競爭酶聯免疫吸附法DetectionMethodofCometitiveenzymelinkedim入境動物檢疫實驗樣品采集運輸和保存規范SNT進行。競爭酶聯免疫吸附CELISA試驗樣品制備試驗時,標準陰性血清弱陽性血清陽性血清和待測血清均用稀釋液作∶倍稀釋。操作方法包被酶標板用包被液按∶稀釋抗原,包被孔酶標板,每孔?L,℃作用h或℃包被過夜。洗板取出酶標板棄去液體,每SZDBZ小反芻獸疫抗體檢測競爭酶聯免疫吸附法df最后次倒置拍干。封閉每孔加封閉液?L,℃反應h。洗板按。加待測樣品和對照血清每份待檢血清加孔,每孔?L;每板均設標準陰性血清弱陽性血清和陽性血清及稀釋液對照各孔,每孔?L。加樣完畢,均用振蕩器充分振蕩混勻,記錄加樣位置。加單克隆抗體每孔加入∶倍稀釋的單克隆抗體?L,℃反應單克隆抗體?L,℃反應h。SZDBZ小反芻獸疫抗體檢測競爭酶聯免疫吸附法。SZDBZ深圳市標準化指。

                    2、達抗原。b單克隆抗體抗PPRVN蛋白特異性單克隆抗體。c實驗動物周齡左右SPF級BALBc雌鼠。PPRV重組N蛋白抗原的檢驗及貯藏性狀PPRV重組N蛋白抗原應為白色固體,無臭無味。濃度測定每瓶用PBS復溶為。用洗板按操作。加酶結合物每孔加入∶倍稀釋的辣根過氧化物酶標記的羊抗鼠IgG?L,℃反應h。洗板按。加底物液每孔加?L底物液,室溫~℃避光反應min。SZDBZ加終止液取出酶標板,每孔快速加入?L終止液。測定OD值在min之內,用酶標儀在nm波長下測定OD值。結果判定計算公式運輸和保存規范SNT進行。競爭酶聯免疫吸附CELISA試驗樣品制備試驗時,標準陰性血清弱陽性血清陽性血清和待測血清均用稀釋液作∶倍稀釋。操作方法包被酶標板用包被液按∶稀釋抗原,包被孔酶標板,每孔?L,℃作用h或℃包被過夜。洗板取出酶標板棄去液體,每孔加洗液?L,洗板,共次爭酶聯免疫吸附CELISA試驗附錄ASZDBZII前言本標準按照GBT給出的規則起。

                    3、應。純凈檢驗按現行中國獸藥典進行檢驗,應無細菌霉菌支原體污染。貯藏與有效期真空凍干抗原于~℃保存,有效期為個月。PPRV單克隆抗體的制備雜交瘤細胞系分泌抗小反芻獸疫病毒核蛋白的特異性單克隆抗體雜交瘤細胞株,由深圳市檢驗檢疫科學研究SZDBZ小反芻獸疫抗體檢測競爭酶聯免疫吸附法df單克隆抗體?L,℃反應h。SZDBZ小反芻獸疫抗體檢測競爭酶聯免疫吸附法。SZDBZ深圳市標準化指導性技術文件SZDBZSZDBZ小反芻獸疫抗體檢測競爭酶聯免疫吸附法DetectionMethodofCometitiveenzymelinkedim外分光光度計測定在OD和OD波長下的光吸收值,按公式OD計算抗原濃度,蛋白質濃度應不低于?gmL。效價測定每瓶PPRV重組N蛋白抗原用去離子水復溶為,用∶稀釋后包被酶標板,每孔?L,℃作用h,洗板次,加入小反芻獸疫單克隆抗體約,℃作用h,洗板次,加入∶稀釋的H辣根過氧化物加洗液?L,洗板,共次。最后次倒置拍。

                    4、草。本標準的附錄A為規范性附錄。本標準由深圳市檢驗檢疫科學研究院提出。本標準起草單位深圳市檢驗檢疫科學研究院深圳出入境檢驗檢疫局動植物檢驗檢疫技術中心。本標準主要起草人阮周曦曾少靈唐金明花群酶標記的羊抗鼠IgG,℃作用h。洗板次,加入底物溶液避光顯色~min,用molLHSO終止反應,用酶標儀讀數OD值大于或等于。特異性檢驗與份小反芻獸疫病毒陽性血清進行酶聯免疫吸附試驗時,應呈陽性反應;與小反芻獸疫病毒陰性血清牛瘟病毒犬瘟熱病毒口蹄疫病毒藍舌病病毒羊痘病毒陽電泳。PI抑制百分率。試劑和材料a包被抗原PPRV重組N蛋白表達抗原。b單克隆抗體抗PPRVN蛋白特異性單克隆抗體。c實驗動物周齡左右SPF級BALBc雌鼠。PPRV重組N蛋白抗原的檢驗及貯藏性狀PPRV重組N蛋白抗原應為白色固體,無臭無味。濃度測定每瓶用PBS復溶為。用單克隆抗體?L,℃反應h。SZDBZ小反芻獸疫抗體檢測競爭酶聯免疫吸附法。SZDBZ深圳市標準化指導性。

                    5、干。封閉每孔加封閉液?L,℃反應h。洗板按。加待測樣品和對照血清每份待檢血清加孔,每孔?L;每板均設標準陰性血清弱陽性血清和陽性血清及稀釋液對照各孔,每孔?L。加樣完畢,均用振蕩器充分振蕩混勻,記錄加樣位置。加單克隆抗體每孔加入∶倍稀釋VN株,為攜帶小反芻獸疫病毒N基因的FastHTAPPRVN重組質粒轉座DHBac,提取桿粒轉染sf昆蟲細胞獲得。由深圳市檢驗檢疫科學研究院構建鑒定保管和供應。fu蝕斑形成單位。rmin轉速單位,轉分。IMDM伊思柯夫改良培養液。SDSPAGE十烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝世界動物衛生組織OIE參考實驗室或中國農業部指定實驗室提供。e待測血清動物血清℃滅能min。f辣根過氧化物酶標記的羊抗鼠IgGHRP標記的羊抗鼠IgG按說明書指定的工作濃度稀釋使用。g包被液洗滌液稀釋液底物液顯色劑終止液配制方法見附錄A。h水符合GBT分析實驗室級水規格。電泳。PI抑制百分率。試劑和材料a包被抗原PPRV重組N蛋白。

                    6、洗板按操作。加酶結合物每孔加入∶倍稀釋的辣根過氧化物酶標記的羊抗鼠IgG?L,℃反應h。洗板按。加底物液每孔加?L底物液,室溫~℃避光反應min。SZDBZ加終止液取出酶標板,每孔快速加入?L終止液。測定OD值在min之內,用酶標儀在nm波長下測定OD值。結果判定計算公式設備恒溫搖床;真空凍干機;臺式高速離心機;凝膠成像系統;CO恒溫箱;多波段酶標儀;洗板機;SZDBZ超聲波破碎儀;單孔道多孔道可調微量移液器?L?L?L?L微量滴頭;紫外分光光度計。PPRV重組N蛋白抗原的制備種毒為攜重組昆蟲桿狀病毒AcNPVPPRVN株,為攜帶小反芻獸a包被抗原PPRV重組N蛋白表達抗原。b單克隆抗體抗PPRVN蛋白特異性單克隆抗體。c實驗動物周齡左右SPF級BALBc雌鼠。SZDBZ小反芻獸疫抗體檢測競爭酶聯免疫吸附法。d標準血清小反芻獸疫標準陽性血清弱陽性血清陰性血清,由世界動物衛生組織OIE血清各份進行酶聯免疫吸附試驗時,應呈陰性反。

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